作者：熊丹宁1， 赵 勇2， 刘 青2， 朱 正2 作者单位：(深圳市第九人民医院1耳鼻咽喉科;2病理科,广东 深圳 518116)
【摘要】 目的：探讨鼻咽癌组织中COX2蛋白和p73蛋白的表达及其临床意义。方法：免疫组化SP法检测86 例鼻咽癌组织中COX2蛋白和p73蛋白的表达。结果：COX2和p73在鼻咽癌中的阳性表达率为80.2%、60.5%;二者呈显著正相关(r=0.668,P<0.01)。结论:COX2蛋白和p73蛋白的过度表达在鼻咽癌的发生进展过程中起重要作用。
【关键词】 肿瘤学;鼻咽癌;COX2蛋白;p73蛋白
Expression of COX2 and p73 Proteins in Nasopharyngeal Carcinoma and their Clinical Significance XIONG Danning1，ZHAO Yong2，LIU Qing2，ZHU Zheng2 (1Department of Otolaryngology;2Department of Pathology,Ninth People's Hospital,Shenzhen,Guangdong 518116,China)
Abstract:Objective To explore the expression of COX2 and p73 proteins in nasopharyngeal carcinoma(NPC) and their clinical significance.Methods The expression of COX2 and p73 proteins were determined with SP staining in 86 patients with nasopharyngeal carcinoma.Results The positive rates of COX2 and p73 expression were 80.2% and 60.5%,respectively.There was significant positive correlation between COX2 expression and p73 expression(r=0.668,P<0.01).Conclusion The overexpression of COX2 and p73 may play an important role in the development of NPC.
Key words: COX2;p73;Nasopharyngeal carcinoma
鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma，NPC)是我国南方常见的恶性肿瘤, 广东为高发区。在确诊的鼻咽癌中,其5年生存率长期徘徊在50%～60%左右。环氧合酶(Cyclooxygenase,COX)和p73是近年发现的新型肿瘤标志物[1-2]，其在鼻咽癌中的表达虽有个别报道，但尚不充分和完善。本研究通过联合检测鼻咽癌肿瘤组织中COX2和p73蛋白的表达情况，以探讨二者在鼻咽癌发生发展中的意义。
1 资料与方法
1.1 病例选择
1999 年-2008 年深圳市龙岗区中心医院病理科鼻咽部活检标本86例,其中男64例,女22例。年龄20～85岁,平均43.3岁。均经HE切片确诊为鼻咽癌。TNM分期：Ⅰ+Ⅱ期38例,Ⅲ+Ⅳ期48例。54例有颈淋巴结转移,32例无转移。患者活检前均未作放化疗。所有标本均经资深病理专家阅片并确诊其组织学类型。
1.2 COX2和p73蛋白检测
试剂COX2兔抗人单克隆抗体(福州迈新生物技术有限公司),p73鼠抗人多克隆抗体(美国SANTA CRUZ公司,1∶50)。采用二步法检测肿瘤组织中COX2和p73蛋白的含量,具体操作步骤按说明书进行。常规切片脱蜡,微波修复抗原,DAB显色,苏木素复染,中性树胶封片。显微镜下观察结果和照相。由试剂公司提供阳性对照片,PBS代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判定
避开肿瘤坏死及边缘区域,随机计数4 个高倍视野(400倍，不足4个高倍视野者计数组织中的全部细胞数),每个视野下计数100个肿瘤细胞,按着色深浅计分:弱,1分;中等,2分;强,3分。根据阳性瘤细胞数目所占百分比计分:<10%,0分;10%～25%,1分;26%～50%,2分;>50%,3分。两项分值相加后计分:0～1分记为阴性(-),2～4分记为弱阳性(+),5分以上记为阳性(++)。
1.4 统计学分析
计数资料采用χ2检测,等级相关分析采用Spearman检验,应用SPSS 10.0软件包进行统计分析，P<0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 形态学变化
由图1～2可见，肿瘤组织中COX2蛋白阳性定位于细胞浆及胞膜,p73蛋白阳性表达部位位于细胞核,呈棕黄色或棕褐色。COX2在鼻咽癌组织中的阳性表达率为80.2%,其中34例(+),35例(++)。p73在鼻咽癌组织中的阳性表达率为60.5%,其中25例(+),27例(++)。表1 COX2与p73在鼻咽癌组织中表达的相关性
2.2 COX2与p73的表达与鼻咽癌的临床相关性
COX2与p73在鼻咽癌组织中的表达成显著正相关(r=0.671,P<0.01),见表1。COX2与p73在鼻咽癌组织中的表达与临床特征的相关性,见表2。表2 COX2、p73的表达与鼻咽癌的临床相关性
3 讨论
COX是花生四烯酸合成前列腺素PG的一个限速酶,可将花生四烯酸转变为各种PG产物,维持机体的各种病理生理过程。COX2基因长约8.3 kb,定位于染色体1q25.2～25.3,由10个外显子和9个内含子构成,被称为“快反应基因”。其编码由604个氨基酸组成的多肽,为诱导性表达,静息时并不表达,在大多数正常组织中难以发现,一般只在受刺激时迅速合成,这些刺激因子可为细胞因子、生长因子、促癌剂以及癌基因产物等[1]。
近年研究表明[3]诱导型COX2在多种恶性肿瘤中高表达,可促进细胞增殖、抑制肿瘤细胞凋亡、促进肿瘤新生血管形成、抑制机体免疫反应、增加转移潜能、抑制DNA修复，也可能是联系炎症与癌变的重要因素之一。鼻咽癌中COX2表达上调亦常见。Peng等[4]研究发现鼻咽癌组织中COX2的阳性表达率显著高于正常鼻咽部黏膜组织,其在N1～N3组与N0组差异有显著性, 且与淋巴结转移有关。蒋代华[5]报道COX2在正常鼻咽黏膜中不表达,而在鼻咽癌组织中表达增加,且与淋巴结转移、鼻咽部鳞状细胞癌的发生、发展过程密切相关。本研究结果中,COX2在鼻咽癌中的阳性表达率达80.2%,Ⅰ+Ⅱ期与Ⅲ+Ⅳ期比较有显著性差异,表明它与肿瘤的进展密切相关，证实了上述结论。
P73 基因由于具有与P53基因高度同源的DNA结合域,因此被归入p53家族[2]。P73基因所定位的1号染色体短臂(1p36.33)在多种人类肿瘤如神经母细胞瘤、结肠癌、恶性黑色素瘤等中发生缺失的频率非常高，但目前有限的研究表明,p73 基因极少突变,其蛋白产物在正常组织中呈广泛低水平或阴性表达。P73基因种植大鼠亦不会在早期发生肿瘤,但会出现明显的脑和免疫系统发育缺陷。与此相反，有些癌细胞中则出现p73蛋白高表达，故推测在正常生理条件下, P73基因可能发挥着不同于p53蛋白的作用。p73蛋白功能与p53高度相似,即能以p53蛋白同样的方式激活P53靶基因p21WAF1等转录,抑制细胞生长,诱导细胞凋亡;而且P73基因是单等位基因表达,只有母本等位基因表达,父本等位基因为沉默基因，故推测P73基因可能通过沉默等位基因而在肿瘤组织中过表达[6]。
有研究[7]显示鼻咽癌组织中p73蛋白呈高表达,其Ⅲ、Ⅳ期阳性表达率与Ⅰ、Ⅱ期比较有显著性差异。本研究结果表明,鼻咽癌组织中p73蛋白呈高表达,阳性率为60.5%,Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期阳性表达率亦有显著性差异,但其表达与患者性别、年龄、颈淋巴结转移均无关，表明鼻咽癌组织中P73基因可能参与调控鼻咽癌的发生发展。
同时，COX2与p73在鼻咽癌组织中的表达成显著正相关,二者在TNM分期的表达均有差别，提示COX2与p73共同参与了鼻咽癌的发生发展过程,并可能影响着病情转归，但其致癌机制以及COX2和p73的联合检测对于鼻咽癌分期及预后的判断价值尚需研究。
【参考文献】
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[4]Peng JP,Chang HC,Hwang CF,et al.Overexpression of cyclooxygenase in nasopharyngeal carcinoma and association with lymphnode metastasis[J].Oral Oncol,2005,41(9):903-908.
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